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CRISPR法高效基因编辑服务

1. 原核方面的CRISPR研究的简要概述

在细菌和古细菌中发现的规律成簇间隔短回文重复序列(clustered regularlyinterspaced short palindromic repeat,CRISPR) ,能在基因水平上有效地抵抗噬菌体和外界各种基因元件的侵害。CRISPR相关蛋白(Cas)是一种RNA介导的双链DNA核酸内切酶,可以剪切外来DNA。只有当入侵的DNA中的目标序列中出现保守的间隔相邻基序(protospacer adjacentmotif,PAM)时,DNA 序列将被在PAM上游的spacer序列内定点切割(4-5nt)。由于CRISPR-Cas9系统只需要Cas9单个核酸内切酶即可完成反应,体系比较灵活简单,特异性高,细胞毒性小,已经成为一项热门的基因组编辑技术,被广泛应用于基因组工程领域。

2. 吐露港生物科技有限公司的服务内容

在此背景下,吐露港生物科技近期推出CRISPR方法进行微生物的基因组改造服务(包括基因敲除、定点突变、定点插入外源序列等)。相比于传统的基因敲除方法,该方法速度快,无痕;非常便于后续的实验研究。特别是点突变服务,目前的公司中,只有吐露港生物科技提供此项技术服务,希望能够为广大科研工作者提供帮助。

目前已经研发成功的CRISPR平台包括:大肠杆菌、沙门氏菌、链霉菌(含模式天蓝色链霉菌和常见的链霉菌)、产溶剂梭菌(及其它常见的梭菌)、枯草芽孢杆菌(需咨询)、酿酒酵母、解脂耶氏酵母(需咨询)、丝状真菌(需咨询)

公司同时具备利用同源重组方法进行基因组编辑的平台,包括:大肠杆菌、链霉菌(PCR-targeting)、分枝杆菌(耻垢分枝杆菌、牛分枝杆菌、鸟分枝杆菌、海分枝杆菌、结核分枝杆菌等)、白色念珠菌等。

对于某些不太常见的微生物物种,若公司暂时没有成熟的系统,且没有其他研究组成功开发过针对该微生物的CRISPR系统(以是否发表论文为准),公司可以代为开发针对该物种的CRISPR基因组编辑系统或利用常规同源重组方法的基因组编辑系统。具体事宜,欢迎来信咨询support@tolobio.com。

3. 服务流程

由于CRISPR基因编辑的过程相对繁琐、耗时较长,在实验开始之前需要广泛沟通,以免出现问题。

目前大肠杆菌的实验平台已经比较成熟(其它的物种请先咨询):(1)从公司网站下载并填写“实验技术服务合同”;(2)将填好的合同(内有基因编辑相关信息)发送至support@tolobio.com;(3)公司工作人员联系客户确认相关信息并签订合同;(4)客户付部分或全部预付款,同时公司开始实验;(5)实验基本完成时将通知客户付剩余款项;(6)公司收到全部款项之后,为客户发货(编辑好的菌株及实验报告单)。

欢迎和各位建立起长期的合作关系!

基于ToloBio技术发表的部分论文

1, Shi-Yuan Li, Qiu-Xiang Cheng*, Jia-Kun Liu, Xiao-Qun Nie, Guo-Ping Zhao and Jin Wang* (2018) CRISPR-Cas12a has both cis-and trans-cleavage activities on single-stranded DNA. Cell ResearchDOI: 10.1038/s41422-018-0022-x

2, Hong Zhang, Qiuxiang Cheng, Aimin Liu*, Guoping Zhao, Jin Wang*(2017) A novel and efficient method for bacteria genome editing employing both CRISPR/Cas9 and an antibiotic resistance cassette. Frontiers in Microbiology8: 812; DOI:10.3389/fmicb.2017.00812  

3, Xiaochun Zhang#, Jingman Wang#, Qiuxiang Cheng#, Xuan Zheng, Guoping Zhao, Jin Wang* (2017) Multiplex gene regulation by CRISPR–ddCpf1. Cell Discovery3: 17018; doi: 10.1038/celldisc.2017.18

4, Chao Lei#, ShiYuan Li#, JiaKun Liu#, Xuan Zheng, GuoPing Zhao,Jin Wang*(2017) The CCTL (Cpf1-assisted Cutting and Taq DNA ligase-assisted Ligation) method for efficient editing of large DNA constructs in vitro.Nucleic Acids Research45(9):e74.

5, ShiYuan Li, GuoPing Zhao*, Jin Wang*(2016) C-Brick: A New Standard for Assembly of Biological Parts Using Cpf1.ACS Synthetic Biology5(12):1383-1388.


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